摘要：目的:正常的胎盘形成是保证胎儿健康生长发育的组织学基础。胎盘功能异常可能导致各种妊娠疾病的发生,比如流产、子痫前期和胎儿宫内生长受限,严重危害母胎健康。正常的滋养细胞功能是胎盘形成的关键,绒毛外滋养细胞(extravillous trophoblast,EVT)的增殖及侵袭功能不足会导致胎盘浅着床,子宫螺旋动脉重塑不足,最终导致胎盘发育异常,但具体的发生原因和致病机理目前尚不完全明确。
既往研究表明,cAMP信号通路在肿瘤细胞的增殖、迁移等功能中发挥重要调控作用,但其对EVT功能的调控机制尚不完全清楚。本文旨在探讨cAMP信号通路对EVT的增殖、侵袭和迁移能力的影响,并对调控的机制进行初步探究。
方法:本文拟采用HTR8/SV-neo细胞系作为人绒毛外滋养细胞体外功能研究模型。用不同浓度的Forskolin溶液(cAMP通路特异性激动剂)对HTR8/SV-neo细胞进行处理,从而改变细胞内的cAMP水平。以仅用DMSO处理细胞组为对照组,分别用cAMP检测试剂盒检测各组细胞内的cAMP浓度,用细胞生长曲线绘制实验及平板克隆实验检测细胞的增殖能力。通过Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化,并通过qPCR和WB实验进一步检测细胞内EMT相关标记物的表达情况。最后用Western Blot方法观察细胞内cAMP信号改变后MAPK信号通路的表达水平。
结果:在10μM和50μM浓度的Forskolin刺激下,HTR8/SV-neo细胞内的cAMP水平呈剂量依赖性升高,并且细胞的增殖性、侵袭性和迁移能力明显增强。qPCR和WB实验进一步证明细胞内的EMT及血管生成标志物m RNA及蛋白表达水平上调,包括MMP2、PECAM、N-钙粘蛋白及VE-钙粘蛋白(P<0.05)。另外,随着细胞内cAMP信号的提高,细胞内MAPK信号通路的磷酸化水平明显升高。
结论:cAMP信号通路可能通过促进MAPK信号通路上的c-raf259/MEK/ERK蛋白水平磷酸化,从而提高HTR8/SV-neo细胞的增殖、侵袭和迁移能力。
团体标准检测：红枣提取液中的环磷酸腺苷每百毫升≥25毫克
